富含血小板血浆对组织工程脂肪移植效果的影响(2)
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参见附件。
1.2.4 脂肪移植实验：以耳中动脉上下分叉上1/4点处为圆心，1.5cm为半径画圆，将圆圈范围内的皮肤和皮下剥离[4]。本实验分四组，分别为AG, AG+SVF， AG+SVF+PRP(不加激活剂), AG+SVF+PRP(加激活剂)。将制备好的成分按各自组合混匀，以每个受区内2.5ml的移植量注射入耳内，缝合创口。
1.3 结果体积测量：分别在1月，3月，6月对兔子耳朵移植的脂肪进行测量，用电子游标卡尺测量其长度、宽度和厚度(减去兔子耳朵固有厚度)，按体积=长度×宽度×厚度×0.5[5]的公式计算各时间点体积，各个时间点的成活率=各时间点体积/原始体积。
1.4 统计方法：采用SPSS16.0统计软件进行统计分析，计量资料以x±s表示，不同组间，不同观察时段用方差分析，两组间比较采用LSD法t检验，以a<0.05为检验水准，对不同组间的差别进行比较。
2 结果
2.1 加入PRP对脂肪移植成活率的影响：4组脂肪的平均成活率如表1所示，采用LSD法t检验，P均小于0.05，视为显著差异。结果表示在脂肪颗粒和血管基质成分的混合物中加入PRP对提高脂肪组织的成活率有显著的效果。
2.2激活剂对脂肪组织移植复合物成活率的影响：4组脂肪各个时间点的成活率详细如表1所示，从图1的成活率曲线[6]中我们可以看出在加B、C、D组在加入血管基质成分后(SVF)后，成活率有所增加。经LSD法t检验，1个月时，A组和B组比较P>0.05，无统计学意义。3个月时，A组和B组比较P<0.05，有统计学意义。6个月时，A组和B组比较P<0.05，有统计学意义，说明SVF对于脂肪组织的成活有一定的作用。1个月时，A组和C组比较P<0.05，有统计学意义。3个月时，A组和C组比较P<0.05，有统计学意义。6个月时，A组和C组比较P<0.05，有统计学意义。1个月时，A组和D组比较P<0.05，有统计学意义。3个月时，A组和D组比较P<0.05，有统计学意义。6个月时，A组和D组比较P<0.05，有统计学意义。A组和C组、D组比较说明了PRP和SVF复合后对脂肪颗粒的成活起到了明显的作用。1个月时，B组和C组比较P>0.05,无统计学意义。B组和D组比较P﹤0.05,有统计学意义。3个月时，B组和C组、D组比较P均小于0.05,有统计学意义。6个月时，B组和C组、D组比较P均小于0.05,有统计学意义，可以认为PRP对脂肪组织复合成分的成活有着显著的作用。实验结果表明富含血小板血浆(PRP)可以提高移植脂肪的成活率。1个月时，C组和D组比较P>0.05,无统计学意义。3个月时，C组和D组比较P<0.05,有统计学意义。6个月时，C组和D组比较P<0.05,有统计学意义。可以认为加入激活剂增加了脂肪组织复合物的成活。
3 讨论
3.1 在临床上，先天发育不足、半侧颜面萎缩、外伤、畸形、肿瘤术后等常见疾病都会造成颌面部的软组织缺损，对患者的身体和心理都造成严重的影响。而临床上对于这类常见疾病的治疗却很难达到比较好的效果。
3.2 目前，对于比较复杂的软组织的缺损和畸形，修复的时候常采用血管化软组织瓣的方法，虽然对于面部的对称等都能起到比较好的临床效果，但这种手术方法具有的这显著的缺点：手术的创伤比较大，需要从其他部位取得皮瓣；术中需要吻合血管，技术难度高；充填量的准确度无法精确控制。鉴于这种方法的缺点，临床上出现了新的技术和方法，主要有生物材料充填和自体脂肪注射。生物材料充填存在这生物相容性的免疫排斥问题，这就大大提高了其应用于临床的难度和成本，使得其适应症也变得相应的比较窄。1986年Illouz 首先在临床上使用了自体脂肪注射这种技术，有效的解决了以前技术上创伤大，技术难，可控性小的难题。德国医生Hoehnke在2007年的时候通过计算机预测设计使的脂肪充填的量得到了更为精确的数值。但现在仍然存在的最大问题是充填脂肪的吸收问题，一般充填的脂肪组织在6个月的成活率只有70%～30%[7]，只能通过多次注射来确保充填的组织量。这样就增加了手术的次数。经过一部分学者的研究发现，主要影响吸收的问题是成熟脂肪细胞无法再生，并对缺氧的耐受力很低，而受区的微血管的建立非常缓慢，移植脂肪的血供无法满足，导致脂肪组织的吸收[8]。
3.3 随着组织工程的出现和发展，越来越多的学者投入到其中，逐渐在体外构建了多种组织，如骨、皮肤、软骨等。Rigotti 等人对20例因肿瘤放疗后胸壁慢性损伤，退行性变的病人。通过脂肪干细胞的治疗，使得变性的组织恢复了正常的结构。这些临床应用并没有将脂肪干细胞单独分离出来，而是直接应用含有多种细胞成分的基质血管成分(stromal vascular fraction cells，SVF),所有的患者均有明显的改善[9]。SVF是血管基质成分，其通过脂肪组织的离心分离得到，其中至少10%为脂肪干细胞[10]。含有多种生长因子、细胞，对移植脂肪组织提供了成活必须的生长因子、血供等，其中含有的脂肪干细胞可分裂、增殖、分化。Yoshimura等人的研究则表明细胞辅助的抽吸脂肪移植术是软组织重建中一种有效地方法[11]。而生长因子是组织工程中很重要的一个环节，经研究表明，富含血小板血浆(PRP)中含有多种生长因子，如VEGF、PDGF、EGF、TGF-Β等多种生长因子，其中VEGF可以促进脂肪干细胞的增殖及向血管内皮细胞分化，Swennen等将自体PRP用于牵张成骨的动物实验中，结果显示PRP对骨愈合有促进作用。这些生长因子将有利于移植的脂肪组织在受区的氧供和血供，以保证脂肪细胞的成活率和更新。
3.4 本实验采用在移植的组织工程脂肪复合体(AG+SVF)中加入或者不加入PRP来观察其1个月、3个月、6个月的脂肪组织成活率的变化。经研究表明含有PRP的实验组可以明显增加移植脂肪组织的成活率，其效果优于不加PRP组，推测与PRP中含有多种生长因子有关，SVF提供脂肪干细胞等多种细胞，富含血小板血浆(PRP)中含有FGF、TGF-β、VEGF、PDGF、EGF等多种生长因子[12]，这些生长因子可以给脂肪干细胞提供微环境促进脂肪干细胞的分裂增殖、分化，并促进血管内皮细胞的增殖和聚集，这些都为脂肪颗粒的成活与更新起到了关键的作用，加快了微血管的形成，使脂肪颗粒得到了更新，降低了其吸收率。而加入激活剂的PRP组脂肪组织吸收率明显减少说明富含血小板血浆(PRP)加入激活剂以后使其因子释放的水平增加，更好的促进了血管基质成分(SVF)中的脂肪干细胞、血管内皮细胞等的增殖、分化 ......
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