在96孔平底細胞培养板中以二维棋盘的横向(自左向右记为1～8)、纵向(自上向下记为A～H)两个方向分别加入二倍比浓度的两种联用药物。蛇葡萄素横向自左向右加入初始浓度为0、16、32、64、128、256、512、1 024 mg/L的药液50 μL，纵向自下往上递增加入已配制好的二倍比系列起始浓度的抗生素(除H行不加入抗生素外)50 μL，再加入1.5×108 CFU/mL菌悬液100 μL。其中H行中除H1孔外其余各孔只加入了蛇葡萄素药液，用于记录单用蛇葡萄素时的MIC，即甲药MIC单用；列1中除H1孔外其余各孔只加入了抗生素，用于记录单用抗生素时的MIC，即乙药MIC单用。在每块培养板上均设置一个阴性对照孔(加入200 μL M-H肉汤培养基)和一个阳性对照孔(加入100 μL菌悬液和100 μL M-H肉汤培养基)。将培养板放入(35±2) ℃的恒温培养箱中孵育24 h，观察每孔中液体浑浊与否，以澄清透明的最小浓度为MIC。

    2.4 时间-杀菌曲线验证

    以临床分离菌株PA319为目的菌株，设置正常对照组、蛇葡萄素单用组、抗生素单用组以及蛇葡萄素与抗生素联用组 ......